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操作高效液相色谱仪的10个注意事项

发布时间:2021-07-19

          
    我们在科学实验中使用的高效液相色谱仪操作过程中难免会出现错误,有时候会比较粗心大意,在不正确的仪器操作中可能会出现错误的结果,以下是为大家提供的十种注意事项。


1. 使用特定的高效液相色谱仪板
使用高效液相色谱仪板代替传统的液相色谱仪板。你为什么问?因为高效液相色谱仪在吸附剂质量、板制造的一致性、板开发程序、检测(衍生)试剂的应用、扫描程序和样品应用设备方面的发展蓬勃发展。高效液相色谱仪板具有更薄的层,并使用较小的二氧化硅颗粒 (?10 µm) 制成。此外,该板上的粒度分布比传统 TLC 板的粒度分布更窄。因此,高效液相色谱仪板具有单位距离分辨率更高、显影更快和溶剂系统消耗更少等优点。


2. 处理注射器时不要粗心
高效液相色谱仪注射器是一项成本高昂的业务。处理这些时总是要小心。将样品装入注射器(手动),并检查是否有气泡(注射器中的气泡意味着装入了错误的体积,导致误报)。如果有任何气泡,只需将注射器保持直立位置并清除其中的气泡。


3. 确保样品正确溶解
在制备高效液相色谱仪样品/标准品时,请确保您使用的溶剂能够完全溶解样品(完全溶解的样品会与溶剂形成均匀的混合物,没有任何明显的沉淀物)。此外,始终通过 0.22 µm 注射器过滤器过滤样品,以去除可能堵塞高效液相色谱仪注射器的任何粗颗粒/沉淀物。


4. 使用前一定要激活板
二氧化硅具有吸湿性,因此高效液相色谱仪板在暴露于空气中时会吸水。通过在烤箱中加热以除去水来激活硅胶板。
如果没有激活就使用板怎么办?根据您的化合物和/或溶剂系统的性质,您的结果可能会以多种方式受到影响。例如,如果化合物是极性的,它可能会与硅胶保持紧密结合并影响其 Rf 值。此外,如果溶剂系统是高度非极性的,它可能无法正确渗透二氧化硅,最终影响样品的移动(注意:请勿触摸板表面,以免皮肤上的油脂或污垢残留在板上. 受污染的板可能会在扫描过程中导致错误信号。要么将板固定在边缘,要么使用干净的镊子)。


5. 不要心不在焉地装盘
自动进样器在其平台上标有 X 轴和 Y 轴。将板与这些轴对齐,以便样品带应用发生在 X 轴上并沿 Y 轴运行。


6. 保持条带的位置和宽度不变
特定化合物的谱带位置决定了最终的 Rf 值。因此,要每次都获得恒定的 Rf,请确保不要从 X 轴和 Y 轴更改示例应用程序的方向。此外,样品谱带应用的宽度必须保持恒定,因为它是谱带强度的直接量度,因此也是化合物数量的量度。所有这些信息都将输入到控制高效液相色谱仪自动进样器的计算机软件中。


7.确保在跑步后正确擦干盘子
一旦板在其各自的溶剂系统中运行,在浸入衍生剂之前始终将其干燥,因为当板浸入衍生剂时,湿带中的化合物会溶解。风干板非常耗时,因此我们使用吹风机在运行后快速干燥板。


8. 开发板时要小心
不要将板浸入衍生剂中的时间过长,因为这会导致化合物在溶液中溶解。我们通常浸几秒钟,这足以让盘子完全浸湿。


9.不要改变烤箱的加热时间和温度
您可能会遇到无法通过肉眼或扫描仪检测到的化合物。例如,糖需要通过浸入在水中制备的硫酸溶液中然后加热来烧焦。加热的量和时间极大地影响条带的强度。因此,每次分析给定化合物时,请保持时间和热量恒定。


10. 不要使用热板进行高效液相色谱仪
您可以使用热板来开发液相色谱仪板,因为它不是定量分析。但是对于高效液相色谱仪,您需要确保热量分布均匀。热板无法均匀分布热量,样品的某些条带将在较高温度下加热,因此扫描仪记录的响应强度会更高。此外,虽然不太可能,但如果板在其长度上有任何弯曲/曲线,它可能不会与热板表面均匀接触,从而导致局部加热区域。相反,要么使用高效液相色谱仪板式加热器,要么使用温度可控的烤箱。确保在整个实验过程中使用相同的加热模式,以确保结果的准确性和重现性。

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