高效液相色谱仪主要的组件及其功能

           
   我们在操作高效液相色谱仪过程中首先要了解仪器的主要部件结构以及它的功能原理，方便我们在操作过程中避免出现错误的操作。下面我们就来认识一下它的主要组件。


泵：

泵的作用是推动（强制）液体（流动相）以特定流速通过色谱仪，以毫升/分钟表示。高效液相色谱仪中的正常流速为 1-2 ml/min，典型的泵可以达到 2000 – 9000 psi 的压力范围，但在U高效液相色谱仪模式下的应用中，操作压力可能高达 15000-18000 psi。正常流量稳定性必须< 1%。


理想的泵应具有以下特点：

溶剂相容性和耐腐蚀性
不受背压影响的恒定流量输送
低死体积，最大限度地减少溶剂转换问题
用于 HPLC（或 LC）的主要泵类型如下：


恒压泵：利用来自气瓶的压力提供通过色谱柱的一致连续流速。
恒流泵： a) 往复活塞泵通过活塞在液压室中的往复运动输送溶剂。往复泵的主要缺点是它会产生脉动流。对于流量敏感的检测器，如微吸附检测器，必须使用脉冲阻尼系统，并降低检测器的灵敏度。b) 注射式泵适用于小口径色谱柱。通过电动螺旋装置将恒定流速输送到色谱柱。
泵应对溶剂、缓冲盐和溶质呈惰性。它们由不锈钢、钛​​和抗性矿物制成。


有两种类型的泵操作：


等度泵- 提供恒定的流动相组成
梯度泵——提供可变流动相组成


注射器：


样品应作为塞子引入，而不会干扰色谱柱填料。进 样器用于将液体样品引入流动相的流动流中。典型的样品体积为 5-20 μL。进样器必须能够承受流动相的高压。预柱是一小段可拆卸的管子，含有与色谱柱相同的填料，可在分析柱之前使用，以防止后者受到污染。预柱还充当缓冲液以防止进样过程中填料窜流。



有四种用于高效液相色谱仪柱：


高性能分析柱[内径（内径）1.0-4.6 mm；长度 15 –250 mm] - 主要用于定性和定量分析
制备柱（内径 > 4.6 毫米；长度 50 – 250 毫米）——主要用于制备工作
毛细管柱（内径 0.1 -1.0 mm；各种长度） 
纳米柱（内径 < 0.1 毫米）



用于构建柱的管道可以是：


玻璃——主要用于生物分子
不锈钢——最受欢迎；能承受高压
PEEK 聚合物 – 对大多数溶剂呈化学惰性且具有生物相容性
色谱柱填充有小直径多孔颗粒。通常使用的多孔材料的尺寸为 1.6 – 5 μm。液/固色谱（LC、HPLC）中使用的柱填料是硅胶、活性炭和氧化铝。大多数用户购买预装柱以用于他们的液相色谱仪。色谱柱中的这些多孔颗粒通常在其表面具有化学键合相，该相与样品组分相互作用以将它们彼此分离——例如，C18 是一种流行的键合相。样品组分的保留过程取决于柱填料的选择和流动相的选择，以推动分析物通过填料柱。