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血细胞计数器进行细胞计数变得很简单

发布时间:2021-07-19

                

       许多使用细胞的生物学应用,例如微生物学、细胞培养和血液工作,都要求我们确定实验的细胞浓度。细胞计数实际上非常简单,需要一个称为血细胞计数器的计数室,这是一种由 19 世纪法国解剖学家发明的用于进行血细胞计数的设备。


       血细胞计数器由厚玻璃显微镜载玻片组成,中间刻有垂直线网格。网格具有指定的尺寸,因此可以知道线条覆盖的区域,这使得计算特定体积溶液中的单元格数量成为可能。最常见的血细胞计数器在中间刻有一个“H”形,包围着两个独立的镜面抛光网格表面,并提供盖玻片安装区域(图 1)。在这里,我们将向您介绍如何使用血细胞计数器并准确计算您的细胞浓度。


通过四个简单的步骤使用血细胞计数器
1. 用台盼蓝稀释样品
台盼蓝是一种染色剂,可让您区分死细胞和活细胞。当与您的细胞样本混合时,任何死细胞都会被染料染成蓝色,这意味着您只能计算那些活的和有活力的细胞。您可以使用任何比例的台盼蓝稀释样品,但 1:1 的比例是最常见的。无论您使用何种稀释度,请务必记下它,因为您在最终计算时需要用到它。


2. 加载血细胞计数器
在开始之前,请使用镜头纸清除所有灰尘颗粒,以确保血细胞计数器及其盖玻片都是干净的。用于安装在血细胞计数器上的盖玻片专门制成比传统显微镜盖玻片更厚,因为它们必须能够克服一滴液体的表面张力。在装入细胞悬液之前,请确保将盖玻片放在计数表面上。然后将带有样品的移液器吸头放入其中一个 V 形孔中,轻轻排出样品。盖玻片下的区域通过毛细作用填充。


应引入足够的液体,以便刚好覆盖镜面,通常约为 10 µl,但不要过度填充表面。您可以在一个血细胞计数器上加载两个样本,两个网格中的每一个都加载一个。然后将加载的血细胞计数器放置在显微镜载物台上,计数网格以低功率聚焦。让样品静置几分钟,避免移动盖玻片,因为它可能会引入气泡并使计数变得困难。


3. 在血细胞计数器中计数细胞
血细胞计数器上的完整网格包含九个正方形,每个正方形为 1 mm 2。血细胞计数器的中心计数区包含 25 个大方格,每个大方格有 16 个小方格。在计算与外线或标线重叠的单元格时,仅计算大正方形顶部或右侧线上的单元格,以避免将单元格计数两次。悬浮液应足够稀释,使细胞或其他颗粒不会在网格上相互重叠,并且应均匀分布。


要进行计数,请确定识别所需细胞类型所需的放大倍数,并系统地对所选方块中的细胞进行计数,以便总计数约为 100 个细胞,这是统计显着计数所需的最少细胞数。对于大单元格,您可以简单地计算四个大角方块和中间方块内的单元格。对于小细胞的密集悬浮液,您可能希望对中心正方形的四个外部和中间正方形中的细胞进行计数,或者制作更稀的悬浮液。


请记住,如果一个单元格与一条线重叠,如果它与顶部或右侧线重叠,则将其计为“入”,如果与底部或左侧线重叠,则将其计为“出”(图 3F)。中间(图 3A)和每个角方块(图 3B-E)的面积为 1 mm x 1 mm = 1 mm 2。每个正方形的深度为 0.1 毫米。因此,该深度处每个方块的最终体积为 100 nl。


4. 计算细胞浓度
您可以使用以下公式计算细胞浓度:


总细胞数/ml =(计数的总细胞数 x 稀释因子 x 10,000 个细胞/ml)/ 计数的方块数


因此,例如,如果您用台盼蓝按 1:1 稀释样品(在这种情况下稀释因子为 2),并且您在四个角正方形加上中央大正方形(计数的正方形数为 5)中计数了 325 个细胞,然后:
 
总细胞数/ml = (325 个细胞 x 2 x 10,000 个细胞/ml)/ 5 = 130 x 10 4 个细胞/ml


如果您想知道原始样品中有多少细胞,只需将细胞浓度乘以总样品体积即可。例如,如果您的原始样品体积为 5 ml,则:


样品中的总细胞数 = 130 x 10 4 个细胞/ml x 5 ml = 650 x 10 4 个细胞


就是这样!一旦您了解了使用血细胞计数器的基础知识,细胞计数真的就像 1、2、3 一样简单!我们很想听听您的任何细胞计数技巧;在评论中给我们留言。

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